Solides performances
L'un des principaux objectifs de l'ajout d'un colorant de viabilité à la conception du panel est de faciliter la discrimination des cellules mortes des portes suivantes. Les cellules mortes se lient aux anticorps de manière non spécifique, ce qui peut fausser l'analyse de la population. Si le réactif perd de son efficacité, la coloration est réduite, ce qui donne l'impression que davantage de cellules mortes sont vivantes. Par ailleurs, si la coloration augmente de manière anormale, davantage de cellules apparaîtront mortes. Des réactifs stables et cohérents sont nécessaires pour obtenir des performances d'analyse efficaces.
Beckman Coulter caractérise pleinement la qualité de ses réactifs. Plusieurs lots de chaque réactif sont testés par plusieurs opérateurs afin de déterminer la concentration de coloration et la durée d'incubation recommandées. Chaque nouveau lot est évalué pour s'assurer que les paramètres de CQ établis sont respectés.
| ViaKrome 405 | ViaKrome 561 | ViaKrome 638 | ViaKrome 808 | |
|---|---|---|---|---|
| Essai 1 | 19,6 | 19,8 | 21,2 | 15,5 |
| Essai 2 | 19,3 | 23,9 | 21,8 | 17,9 |
| Essai 3 | (21,0 %) | 20,6 | 22,9 | 17,0 |
| Essai 4 | 17,4 | 24,0 | 17,8 | 16,3 |
| % moyen de cellules mortes | 19,3 | 22,1 | 20,9 | 16,7 |
| SD | 1,5 | 2,2 | 2,2 | 1,0 |
| CV% | 7,6 % | 9,9 % | 10,6 % | 5,9 % |
Précision du test. Un mélange de cellules Jurkat et de cellules Jurkat soumises à un stress thermique (55 °C pendant 10 minutes) a été coloré à l’aide du colorant de viabilité fixable ViaKrome indiqué. Les échantillons ont été prélevés immédiatement après coloration (n = 4). La population de cellules mortes en pourcentage ainsi qu’une analyse statistique de la variation sont indiquées. Le CV du test variait de 5,9 à 10,6 %.
Stabilité à 18-25 ° du colorant de viabilité fixable ViaKrome 405
Stabilité à 18-25 ° du colorant de viabilité fixable ViaKrome 561
Stabilité à 18-25 ° du colorant de viabilité fixable ViaKrome 638
Stabilité à 18-25 ° du colorant de viabilité fixable ViaKrome 808
Stabilité de la solution mère. Le colorant de viabilité fixable ViaKrome indiqué a été reconstitué dans du PBS et utilisé immédiatement (0 heure) ou conservé à 18-25 °C pendant la durée indiquée jusqu'à 4 jours (96 heures) à l'abri de la lumière. Un mélange de cellules Jurkat et de cellules Jurkat soumises à un stress thermique (55 °C pendant 10 minutes) a été coloré et les données ont été acquises sur le cytomètre en flux CytoFLEX LX. Le graphique illustre le pourcentage de cellules mortes (barres) et le rapport signal/bruit (ligne) pour chaque point dans le temps. Les deux mesures restent cohérentes sur la période étudiée.
