Protocole de coloration du colorant de viabilité fixable ViaKrome

Matériaux

  • PBS
  • Sérum de veau fœtal
  • Réactif PerFix-nc 1, 2 et 3 (Numéro de produit B10825)
  • PBS avec 0,5% de formaldéhyde

Lignées cellulaires

  1. Utiliser des lignées cellulaires à raison de 5 x 106 cellules par ml, 100 μl par test (5 x 105 cellules par test)
  2. Ajouter 2,5 ul* de colorant de viabilité fixable ViaKrome
  3. Vortex
  4. Incuber entre 18 et 25 °C pendant 20 minutes, à l’abri de la lumière
  5. Ajouter 3 ml de PBS 1X
  6. Centrifuger à 300 g pendant 5 minutes
  7. Aspirer le surnageant
  8. Ajouter 500 μl de PBS 1X / 0,5 % de formaldéhyde.
  9. Recueillir des données à l'aide d'un cytomètre en flux

*Si vous souhaitez utiliser d'autres protocoles et/ou échantillons, une titration du colorant de viabilité fixable ViaKrome est recommandée afin de déterminer la dose optimale.

Coloration typique des lignées cellulaires à l’aide de colorants de viabilité fixables viaKrome

Coloration représentative à l'aide des colorants de viabilité fixables ViaKrome. Représentation bi-paramétrique (Diffusion orthogonale par rapport à Intensité de fluorescence) de la coloration d'un mélange de cellules non traitées (cellules vivantes) et de cellules Jurkat traitées thermiquement (cellules mortes). L'acquisition est effectuée à l’aide d’un cytomètre en flux CytoFLEX LX série N-V-B-Y-R-I et l'émission a été détectée via le filtre passe-bande indiqué. Le colorant ViaKrome 405 a été excité avec le laser violet (405 nm), panel A, le colorant ViaKrome 561 a été excité avec le laser jaune vert (561 nm), panel B, le colorant ViaKrome 638 a été excité avec le laser rouge (638 nm), panel C et le colorant ViaKrome 808 a été excité avec le laser infrarouge (808 nm), panel D.

Cellules mononucléées de sang périphérique (PBMC)

  1. Ajouter 2,5 μl de colorant de viabilité fixable ViaKrome dans 50 μl de PBMC à 10 x 106 cellules/ml
  2. Vortex
  3. Incuber entre 18 et 25 °C pendant 20 minutes, à l’abri de la lumière
  4. Ajouter 3 ml de PBS 1X
  5. Centrifuger à 150 g pendant 5 minutes. Retirer le surnageant par aspiration.
  6. Ajouter 50 µl de sérum de veau fœtal. Vortexer jusqu'à séparation du culot.
  7. Procéder à la coloration intracellulaire

*Si vous souhaitez utiliser d'autres protocoles et/ou échantillons, une titration du colorant de viabilité fixable ViaKrome est recommandée afin de déterminer la dose optimale.

Coloration typique des PBMC à l’aide de colorants de viabilité fixables viaKrome

Coloration représentative à l'aide des colorants de viabilité fixables ViaKrome. Représentation bi-paramétrique (Diffusion orthogonale par rapport à intensité de fluorescence) de la coloration des cellules mononucléaires de sang périphérique (PMBC). L'acquisition est effectuée à l’aide d’un cytomètre en flux CytoFLEX LX série N-V-B-Y-R-I et l'émission a été détectée via le filtre passe-bande indiqué. Le colorant ViaKrome 405 a été excité avec le laser violet (405 nm), panel A, le colorant ViaKrome 561 a été excité avec le laser jaune vert (561 nm), panel B, le colorant ViaKrome 638 a été excité avec le laser rouge (638 nm), panel C et le colorant ViaKrome 808 a été excité avec le laser infrarouge (808 nm), panel D.

 

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