Pourquoi utiliser un colorant de viabilité ?

Les cellules mortes se lient aux anticorps de manière non spécifique, ce qui fausse le calcul du pourcentage positif. Les cellules mortes augmentent également en autofluorescence, ce qui interfère avec la détection de signaux spécifiques.  L'élimination des cellules mortes doit être achevée avant l'analyse de la population par gating séquentiel.

Comparaison de l'analyse des échantillons sans et avec exclusion de cellules mortes.Les PBMC décongelées ont été stressées par la chaleur (55 °C pendant 10 minutes) avant la coloration par immunocoloration sans (A) ou avec (B) l'ajout du colorant de viabilité fixable ViaKrome 405. Les cellules ont ensuite été traitées avec le kit de préparation de coloration cellulaire Perfix-nc (Numéro de produit B10825) et colorées avec Granzyme B-FITC, CD19-PE, CD14-ECD, CD79a-PC5.5, CD3-PC7 et CD45-Krome Orange. Les données ont été collectées à l'aide du cytomètre en flux CytoFLEX LX série N-V-B-Y-R-I et analysées avec le logiciel d'analyse Kaluza.  Les statistiques de gate montrent le pourcentage de la population parente et diffèrent dans les deux conditions, indiquant l'effet de l'élimination des cellules mortes avant le gating séquentiel.