Comparaison des réactifs à base d'ester de NHS avec le colorant de viabilité fixable ViaKrome

Tous les colorants de viabilité fixables disponibles sont basés sur la réticulation des groupes fonctionnels activés par les esters de NHS avec des amines primaires sur des protéines.  L'hydrolyse entre en concurrence avec la réaction de réticulation, ce qui réduit l'efficacité de la réaction de marquage.  Cette réaction d'hydrolyse dépend du pH et de la température.  La demi-vie du groupe réactif peut être aussi courte que 10 minutes à un pH de 8,6 à 4 °C.  Cela signifie que dans les solutions aqueuses, le colorant est rendu inerte sur une courte période, ce qui réduit la coloration.

Réactions des amines réactives en chimie des colorants

En outre, la vapeur d'eau dans la solution mère peut entraver les performances du réactif, ce qui limite la coloration.  Lorsque la coloration est réduite, un nombre plus élevé de cellules semblent vivre, alors qu'en réalité elles sont mortes. Pour cette raison, les réactifs sont généralement reconstitués dans du DMSO, stockés à -80 °C et aliquotés en petits volumes pour un usage unique.  Les procédures de coloration doivent être soigneusement chronométrées pour obtenir des résultats uniformes.

Les colorants de viabilité fixables ViaKrome n'utilisent pas de groupes réactifs ester de NHS.  Les chimies ne sont pas soumises à l'hydrolyse, ce qui permet d'obtenir des performances plus efficaces dans les procédures d'essai standard.

 

Stabilité de coloration des colorants de viabilité fixables ViaKrome

Résultats du test 2 et 24 heures après la coloration. Un mélange de cellules Jurkat et de cellules Jurkat soumises à un stress thermique (55 °C pendant 10 minutes) a été coloré à l’aide du colorant de viabilité fixable ViaKrome indiqué.  Les échantillons ont été prélevés immédiatement et soit 2 heures (n = 4) soit 24 heures (n = 3) après la coloration.  La population de cellules mortes en pourcentage du temps zéro est représentée graphiquement.  Les barres d’erreur représentent la variation moyenne entre les redosages.  Le prélèvement à 2 heures est de 98 à 100 % du temps 0 et le prélèvement à 24 heures est de 91 à 103 % du temps 0.

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