Overview

  • Extraction et purification d'ARN total de haute qualité à partir de cultures cellulaires dans une plaque de 96 puits
  • Suppression efficace d’ADN génomique et d'autres contaminants
  • Aucune centrifugation ni filtration sous vide nécessaire
  • Idéal pour des applications relatives à l'expression des gènes
  • Compatible avec les méthodes de traitement manuel et d’automatisation intégrale sur les automates de pipetage Biomek NXP et FXP Lab
  • Débit de traitement : Deux plaques de 96 puits en deux heures et 15 minutes environ sur l'automate de pipetage Biomek FXP

Application: extraction d’ARN à partir de cultures cellulaires
Techniques d'application en aval:analyse de la PCR quantitative en temps réel et microarray

Présentation du procédé

1. Commencer avec des cultures cellulaires ou des cellules primaires 2. Lyser les cultures cellulaires avec le tampon de lyse et la protéinase K, transférer dans une nouvelle plaque 3. Lier l’ARN total aux billes paramagnétiques 4. Séparer les billes des contaminants, laver à l'aide d'un tampon de lavage et de l'éthanol 5. Ajouter la désoxyribonucléase pour digérer l'ADN génomique 6. Effectuer une nouvelle liaison entre l'ARN et les billes avec un tampon de lavage et retirer les contaminants 7. Laver les billes magnétiques avec de l'éthanol à 70 % pour retirer les contaminants résiduels 8. Éluer l'ADN des particules magnétiques.

Récupération accrue d'acides nucléiques

La méthode d'extraction du système Agencourt RNAdvance Cell v2 permet systématiquement de récupérer davantage d'ARN total comparé aux méthodes concurrentes RNeasy* et MagneSil* à partir du même nombre de cellules (Figure 1).

Figure 1. L'ARN total extrait de 5x104 cellules HeLa a été isolé grâce au système Agencourt RNAdvance Cell v2, au kit RNeasy, ou MagneSil. L'analyse quantitative a été réalisée grâce au dosage RiboGreen*. Le système Agencourt RNAdvance Cell v2 a constamment enregistré un plus grand rendement que ses concurrents RNeasy et MagneSil.

Purification d’ARN de qualité

Le système Agencourt RNAdvance Cell v2 a été comparé aux kits RNeasy et MagneSil pour la qualité de l’ARN total. L'analyse des échantillons réalisée à l'aide de l'analyseur biologique Agilent* 2100 a démontré que l'ARN isolé par le système Agencourt RNAdvance Cell v2 avait toujours un numéro d'intégrité (RIN) plus élevé que les technologies concurrentes (Figure 2). Pour plus d'informations sur les résultats de qualité du numéro d'intégrité de l’ARN (RIN), veuillez consulter « Genomics and Proteomics » v.4 ; n º5, pp.14– 21.

Figure 2.  RNA samples were isolated using the Agilent Bioanalyzer 2100 RNA NanoChip. Total RNA was extracted from 5 x 104 HeLa cells using (A) Agencourt RNAdvance Cell v2, (B) RNeasy, or (C) MagneSil (standard protocols). The average RNA Integrity Number (RIN) as determined from Agilent 2100 bioanalyzer (five replicates of extraction performed on 5 x 104 HeLa cells for each kit).

Résumé

Le système Agencourt RNAdvance Cell v2 est une méthode simple et extrêmement efficace pour isoler et purifier l'ARN total des cultures cellulaires. Ses performances supérieures offrent de l'ARN de haute qualité destiné à être utilisé dans le cadre d'applications de microarray ou de PCR en temps réel relatives à l'expression des gènes. Grâce à la flexibilité que permettent les formats manuel et intégralement automatique de la plaque à 96 puits, la technologie SPRI à base de billes paramagnétiques d'Agencourt permet de retirer les contaminants efficacement sans recourir à la filtration ou la centrifugation. Le système Agencourt RNAdvance Cell v2 permet d'obtenir des résultats plus constants et de meilleure qualité ainsi qu'une récupération plus importante comparé aux autres technologies d'isolation et de purification d'ARN grâce à la solution d'automatisation qui vous permet de vous occuper d'autre chose.